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產(chǎn)品介紹：             

產(chǎn)品說(shuō)明

本產(chǎn)品可用于擬南芥、煙草、水稻等植物樣本的基因純化。純化原理是利用硅膠膜柱可逆吸附體系中的DNA，經(jīng)漂洗液清洗除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及多純化液洗脫獲得基因組DNA。一次可從不超過(guò)100材料中提取到2-20μg的高純度基因組(OD260/OD280=1.7-1.9)，此基因組DNA可直接酶切等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

質(zhì)量控制

純化的基因組DNA質(zhì)量通過(guò)限制性酶切和單拷

保存條件

RNase保存于-20℃。其他的室溫保存

注意事項(xiàng)

●漂洗液PE**次使用前請(qǐng)按瓶上標(biāo)簽加入3倍體積的無(wú)水乙醇，即15ml漂洗液PE加入45ml無(wú)水乙醇，30ml漂洗液PE加入90ml無(wú)水乙醇，使用后立即蓋緊蓋子。

●緩沖液GPL室溫保存可能會(huì)有沉淀產(chǎn)生，在56℃加熱溶解，待恢復(fù)室溫后混勻即可使用。不會(huì)影響基因組DNA純化效率。

●應(yīng)盡量使用新鮮的實(shí)驗(yàn)材料，確保提取的基因組DNA不被降解。不能立刻提取基因組DNA的實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡快置于液氮或-70℃

冰箱中保存并避免反復(fù)凍融。

●使用液氮研磨組織材料時(shí)，應(yīng)隨時(shí)加入液氮，確保提取的基因組DNA不被降解。

●基因組DNA需長(zhǎng)期保存時(shí)，建議使用純化液TE。用無(wú)菌的離心管分裝后保存于-20℃或-80℃。

●所有離心步驟均為室溫下進(jìn)行。

●請(qǐng)嚴(yán)格按照操作步驟操作。

操作步驟

1 取植物新鮮組織約100mg或干重組織約30mg，加入液氮充分研磨。

2 將研磨好的粉末迅速轉(zhuǎn)移到預(yù)先裝有700μl65℃預(yù)熱緩沖液GPL的離心管中(實(shí)驗(yàn)前在預(yù)熱的GPL中加入巰基乙醇，使其終濃度為0.1%)，加入1μlRNase，迅速顛倒混勻后，將離心管放在65℃水浴20min，水浴過(guò)程中顛倒離心管以混勻樣品。

3 加入700μl氯仿，充分混勻，12,000rpm(~13,400×g)離心5min。

●如果是提取富含多酚或淀粉的植物組織，可在第3步前，用酚:氯仿/1:1進(jìn)行等體積抽提。

4 小心將上一步所得上層水相轉(zhuǎn)入一個(gè)新的離心管中，加入等體積緩沖液GPD，充分混勻。

5 將混勻的液體轉(zhuǎn)入純化柱，靜置1min，12,000rpm離心30sec,棄濾液。(吸附柱容積為700μl左右，可分次加入離心。)

6 向純化柱中加入500μl去蛋白液PS。12,000rpm離心30sec,棄濾液。

7 向純化柱中加入500μl漂洗液PE。12,000rpm離心30sec,棄濾液。

8 重復(fù)步驟7，向純化柱中加入500μl漂洗液PE。12,000rpm離心30sec,棄濾液。

9 離心純化柱，12,000rpm離心2min，以徹底去除純化柱中殘留的液體。

●此步驟的作用是去除殘留乙醇，避免影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(PCR或酶切)。同時(shí)利于基因組DNA充分溶解。

10 將純化柱置于新的1.5ml離心管中。向純化柱中央處，懸空滴加40-100μl純化液TE。室溫放置2min。12,000rpm離心2min，管底即為高純度基因組DNA。-20℃保存。

●純化液TE可用去離子水代替，但其pH需為8.0-8.5。

●對(duì)純化液TE60℃預(yù)熱，會(huì)提高基因組DNA的產(chǎn)量。

注意事項(xiàng)：

  ● RNA樣本保存液如出現(xiàn)沉淀，37℃加熱振蕩混勻。

  ● 加入RNA樣本保存液后，樣本不能立即置于-20℃或-80℃，要先4℃置放過(guò)夜，待組織充分浸潤(rùn)后再置于低溫保存。

  ● 樣品浸沒(méi)在RNA樣本保存液中，可在37℃保存1天，25℃保存1周，4℃保存1個(gè)月，-20℃長(zhǎng)期保存；使用時(shí)請(qǐng)注意保存時(shí)限。

  ● 保存在RNA樣本保存液中的樣本可不經(jīng)特殊處理，離心或直接使用和新鮮組織一樣的RNA提取方法提取RNA。

  ● RNA樣本保存液可以配合各種常見(jiàn)的RNA提取試劑盒使用，如東盛、invitrogen、omega等公司出品的RNA提取試劑盒，不影響試劑盒操作，不影響提取所得RNA質(zhì)量及其后續(xù)實(shí)驗(yàn)。