植物細(xì)胞組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟

   植物的性：植物體的任何一個(gè)細(xì)胞都具有生長(zhǎng)分化成為一個(gè)完整植株的能力，稱為植物的性。

    植物組織培養(yǎng)就是利用植物的性進(jìn)行離體無(wú)菌植物培養(yǎng)的一門技術(shù)。植物組織培養(yǎng)按其原始意義，就是指愈傷組織培養(yǎng)。但發(fā)展至今，其范圍日益擴(kuò)大，已包括植物和它的離體器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。因此，擁有幾種不同水平的培養(yǎng)技術(shù)，即整體的、器官的、組織的、細(xì)胞的和原生質(zhì)的培養(yǎng)技術(shù)。

    儀器設(shè)備：1．酒精燈、三角燒瓶，培養(yǎng)皿；2．鑷子、剪刀、剖針；3．雙筒解剖顯微鏡；4．光照培養(yǎng)箱或溫室；

    材料煙草無(wú)菌苗、豌豆幼苗。

    試劑

    （1）MS培養(yǎng)基，植物激素：NAA、6-BA等；

    （2）飽和漂液（次氯酸鈉）；

    （3）70%酒精、100%酒精、酒精棉球；

    （4）無(wú)菌水

    四．實(shí)驗(yàn)步驟

    豌豆苗的莖尖培養(yǎng)

    ⑴取發(fā)芽6天的豌豆幼苗10株，簡(jiǎn)取1厘米左右的莖尖，浸入70%的酒精中1分鐘，再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘，（此步以后要求無(wú)菌）用無(wú)菌水中沖洗5次，在滅菌的濾紙上吸干水分，放入滅菌的培養(yǎng)皿中。

    ⑵在雙目解剖鏡下，用滅菌的解剖針剝?nèi)ビ兹~露出生長(zhǎng)錐，用滅菌的解剖針挑取帶著兩至三個(gè)葉原基的生長(zhǎng)錐。

    ⑶將挑好的莖尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-芐基腺嘌呤（6-BA）的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織形成，用封口膜將培養(yǎng)皿封好。

    （4）在恒溫培養(yǎng)箱中，26℃下,培養(yǎng)六周，形成愈傷組織，經(jīng)繼代后，可用于生根培養(yǎng)

（5）生根培養(yǎng)階段，將已形成愈傷組織的豌豆莖尖轉(zhuǎn)移至含有較低濃度植物激素（如減半的NAA和6-BA）的MS培養(yǎng)基中，以促進(jìn)根系的形成。此階段需繼續(xù)維持無(wú)菌條件，避免微生物污染影響培養(yǎng)效果。

（6）觀察記錄：在生根培養(yǎng)過(guò)程中，定期使用雙筒解剖顯微鏡觀察根系的生長(zhǎng)情況，記錄根的數(shù)量、長(zhǎng)度及形態(tài)變化。同時(shí)，注意培養(yǎng)皿內(nèi)的濕度和光照條件，適時(shí)調(diào)整以優(yōu)化培養(yǎng)環(huán)境。

（7）煉苗與移栽：當(dāng)根系發(fā)育良好，達(dá)到一定數(shù)量和長(zhǎng)度時(shí)，開始進(jìn)行煉苗處理。逐步減少培養(yǎng)箱內(nèi)的光照強(qiáng)度和時(shí)間，使植株逐漸適應(yīng)外界環(huán)境。煉苗結(jié)束后，將植株小心地從培養(yǎng)基中取出，洗凈根部殘留的培養(yǎng)基，移栽至經(jīng)過(guò)消毒的土壤中，置于溫室或適宜的生長(zhǎng)環(huán)境中繼續(xù)培養(yǎng)。

（8）后續(xù)觀察與管理：移栽后的豌豆植株需密切關(guān)注其生長(zhǎng)狀況，包括葉片顏色、植株高度、開花結(jié)果等，及時(shí)澆水、施肥并防治病蟲害，以確保植株健康生長(zhǎng)，最終收獲種子或用于進(jìn)一步的遺傳學(xué)研究。

通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，不僅掌握了植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)的基本技術(shù)，還深刻理解了無(wú)菌操作的重要性及其在植物繁殖、遺傳改良等方面的廣泛應(yīng)用價(jià)值。