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?蘋(píng)果酸脫氫酶(NAD-MDH)試劑盒樣本測(cè)定的準(zhǔn)備

發(fā)表時(shí)間:2024-10-24 13:49

蘋(píng)果酸脫氫酶(NAD-MDH)試劑盒樣本測(cè)定的準(zhǔn)備:

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為1000~5000:1的比例(建議2000萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。接下來(lái),我們進(jìn)入樣品測(cè)定的關(guān)鍵步驟——樣品預(yù)處理與檢測(cè)準(zhǔn)備。對(duì)于血清(漿)樣品,由于其相對(duì)均一且已處于液態(tài),無(wú)需復(fù)雜的破碎或勻漿過(guò)程,直接取適量血清(漿)樣本,按實(shí)驗(yàn)需求稀釋或直接加入檢測(cè)板中,確保每個(gè)樣本孔內(nèi)體積一致,以消除體積差異對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。此時(shí),需特別注意避免氣泡產(chǎn)生,以免影響后續(xù)光學(xué)讀取的準(zhǔn)確性。

隨后,進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。準(zhǔn)備一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,按照與樣品相同的處理流程加入到檢測(cè)板中,確保標(biāo)準(zhǔn)品與待測(cè)樣品在同一條件下進(jìn)行檢測(cè),以建立濃度與信號(hào)值之間的線性關(guān)系。這一步驟對(duì)于結(jié)果的定量分析至關(guān)重要,它確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

在完成上述所有準(zhǔn)備工作后,進(jìn)入正式的檢測(cè)階段。根據(jù)實(shí)驗(yàn)所采用的試劑盒或儀器說(shuō)明,設(shè)定好相應(yīng)的檢測(cè)參數(shù),如溫度、時(shí)間、波長(zhǎng)等,啟動(dòng)檢測(cè)程序。期間,需密切關(guān)注儀器的運(yùn)行狀態(tài),確保無(wú)異常情況發(fā)生。同時(shí),記錄好每個(gè)步驟的時(shí)間點(diǎn)和關(guān)鍵操作,以便后續(xù)數(shù)據(jù)分析和問(wèn)題追溯。

待檢測(cè)程序完成后,收集并整理檢測(cè)數(shù)據(jù),利用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行結(jié)果計(jì)算。對(duì)于異常值或不符合預(yù)期的結(jié)果,需進(jìn)行復(fù)檢或進(jìn)一步分析,以確認(rèn)其真實(shí)性及可能的原因。最后,將實(shí)驗(yàn)結(jié)果整理成報(bào)告,包括實(shí)驗(yàn)方法、步驟、數(shù)據(jù)、圖表及結(jié)論等,供后續(xù)研究或臨床應(yīng)用參考。



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