小鼠雜交瘤細胞；2G9B9H6A2培養(yǎng)步驟

小鼠雜交瘤細胞；2G9B9H6A2培養(yǎng)步驟：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法三：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

1）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。棄培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入到凍存液中。

血瓊脂培養(yǎng)基基礎

苯丙氨酸培養(yǎng)基

葡萄糖銨培養(yǎng)基

尿素瓊脂培養(yǎng)基基礎

緩沖動力-硝酸鹽培養(yǎng)基

動力—硝酸鹽培養(yǎng)基(A法)

明膠培養(yǎng)基(營養(yǎng)明膠)

克氏雙糖鐵瓊脂

緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR-VP培養(yǎng)基、磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基)

Koser氏枸椽酸鹽肉湯

西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基

蛋白胨水 (靛基質培養(yǎng)基)

糖發(fā)酵培養(yǎng)基基礎

氨基酸脫羧酶試驗基礎培養(yǎng)基

三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基(TSI)藥典

三糖鐵瓊脂(TSI)

葡萄糖銨培養(yǎng)基

尿素瓊脂培養(yǎng)基基礎

緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR-VP培養(yǎng)基、磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基)

Koser氏枸櫞酸鹽肉湯

西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基