肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶（CPT1)可見分光光度法檢測試劑盒操作步驟

肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶（CPT1)可見分光光度法檢測試劑盒操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：產(chǎn)品僅用于科研

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

3. 樣品測定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔。

注意：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時間先后差異而導(dǎo)致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘。

說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。

c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進(jìn)行雙波長測定。

4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算：

a. 百分率的計(jì)算：

參考如下計(jì)算公式計(jì)算百分率：

百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%

如果沒有設(shè)置空白對照3，則可以把計(jì)算公式簡化為：

百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%

如果計(jì)算出來的百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測定出來的百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測樣品。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中百分率為50% 時，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。

高分子量激肽原重鏈抗體

鉀通道四聚體結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體

Kelch樣蛋白26抗體

賴氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，亮氨酸相關(guān)序列抗體

Kelch樣蛋白10抗體

Kelch樣蛋白11抗體

Kelch樣蛋白3抗體

Kelch樣蛋白14抗體

Kelch樣蛋白31抗體

Kelch樣蛋白32抗體

鉀電壓閥門通道混合器相關(guān)亞家族成員5抗體

TGF-β誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1抗體

離子通道蛋白Kv1.3抗體

磷酸化KLF5抗體

磷酸化KLF5抗體

特異性鉀離子通道蛋白抗體

沉默驅(qū)動蛋白KIF4A抗體

ATP敏感鉀離子通道蛋白抗體

KIAA1462蛋白抗體

KIAA1549蛋白抗體

基爾曼氏細(xì)小病毒VP1/VP2抗體C端

Kelch樣蛋白20抗體

激肽釋放酶抑制劑抗體

kelch樣蛋白7抗體

TWIK相關(guān)酸敏感鉀離子通道蛋白9抗體

激肽釋放酶6抗體

激肽釋放酶8抗體

血漿激肽釋放酶抗體

磷酸化抑癌蛋白EZH2抗體

組蛋白去甲基化酶JARID1B抗體

硫酸角質(zhì)素抗體

角質(zhì)細(xì)胞生長因子調(diào)節(jié)蛋白2抗體